BAMBI Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403701-ACT

BAMBI (inibidor de membrana ligado a BMP e activina) codifica um pseudorreceptor transmembranar que se assemelha aos receptores do tipo I da família TGF-β, mas não possui o domínio quinase intracelular, atuando assim como um modulador dependente do contexto da sinalização de BMP e de TGF-β/Activina. Ao influenciar a dinâmica de fosforilação de SMAD e a formação de complexos receptores, o BAMBI pode ajustar programas transcricionais a jusante que controlam a plasticidade epitélio-mesenquimal, a diferenciação e respostas inflamatórias. A expressão desregulada de BAMBI tem sido associada a alterações na atividade da via de TGF-β em contextos relacionados a fibrose e inflamação, e é frequentemente investigada em estudos sobre microambiente tumoral e sinalização metastática. Como nó regulatório na membrana, o BAMBI é relevante para dissecar a comunicação cruzada entre programas associados a BMP, Wnt/β-catenina e NF-κB em modelos celulares humanos.

BAMBI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de BAMBI sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BAMBI O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus BAMBI em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição BAMBI, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BAMBI. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus BAMBI nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BAMBI no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BAMBI em células tumorais com expressão de BAMBI silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.