Plásmido CRISPR de Activación (h) BAF60a: sc-402641-ACT

SMARCD1 codifica BAF60a, una subunidad central del complejo de remodelación de cromatina dependiente de ATP SWI/SNF (BAF), que regula el posicionamiento de los nucleosomas y la accesibilidad de la cromatina para controlar programas de transcripción. BAF60a coordina las interacciones entre factores de transcripción y la maquinaria de remodelación para influir en la especificación de linaje, la progresión del ciclo celular y la expresión génica sensible a estímulos, incluidas vías vinculadas al desarrollo y la diferenciación. Como parte del complejo BAF, SMARCD1 contribuye a la regulación epigenética de los estados de potenciadores y promotores, e interseca con redes de señalización como los circuitos transcripcionales de receptores hormonales y de respuesta al estrés. La desregulación de los componentes de SWI/SNF se asocia con estados de cromatina alterados observados en múltiples cánceres y fenotipos del neurodesarrollo, lo que convierte a BAF60a en una diana relevante para estudios mecanísticos del control transcripcional.

BAF60a El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SMARCD1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

BAF60a El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SMARCD1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SMARCD1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de BAF60a. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SMARCD1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de BAF60a en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía BAF60a en células tumorales con expresión de SMARCD1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.