BACE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h2): sc-401500-KO-2

Panoramica

BACE1 codifica la beta-site amyloid precursor protein cleaving enzyme 1 (BACE), una proteasi aspartilica che avvia il processamento amiloidogenico di APP generando l’estremità N-terminale dei peptidi Aβ. Questa attività si intreccia con il traffico endosomiale e la proteostasi lisosomiale, in cui i compartimenti acidi favoriscono la maturazione di BACE e il clivaggio dei substrati. Il processamento dipendente da BACE1 influenza la funzione sinaptica e la segnalazione neuronale modulando i livelli di frammenti derivati da APP e di altri substrati neuronali. Un’espressione o un’attività di BACE1 deregolate sono state associate alla patologia molecolare legata alla malattia di Alzheimer e BACE1 è spesso studiata nel contesto della biologia della via dell’amiloide e dei meccanismi di neurodegenerazione.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BACE (h2) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BACE1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BACE1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BACE1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BACE.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BACE1 per lo studio della segnalazione di BACE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BACE1 critici per la funzione di BACE
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BACE1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BACE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BACE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BACE1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BACE Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BACE (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BACE1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BACE1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.