Plasmide CRISPR/Cas9 KO BABAM1 (h): sc-409906

Présentation

BABAM1 (BABAM1) est un composant essentiel du complexe BRCA1-A, qui reconnaît la chromatine ubiquitinylée au niveau des cassures double brin de l’ADN et contribue à coordonner la réponse aux dommages de l’ADN. Grâce à ses interactions avec BRCA1 et des facteurs associés, BABAM1 soutient la stabilité du génome en modulant la signalisation des dommages et en influençant le choix des voies de réparation, notamment des processus liés à la régulation de la recombinaison homologue. Son activité est liée au contrôle des points de contrôle du cycle cellulaire et aux réponses au stress réplicatif, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la coordination, dépendante de la chromatine, des mécanismes de réparation. Un dérèglement de la fonction du complexe BRCA1-A a été associé à une altération de la capacité de réparation de l’ADN et à des phénotypes d’instabilité génomique observés dans de multiples contextes cancéreux.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO BABAM1 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène BABAM1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du BABAM1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert BABAM1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine BABAM1.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en BABAM1 pour l'étude de la signalisation de BABAM1, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de BABAM1 essentiels à la fonction de BABAM1
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de BABAM1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le BABAM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le BABAM1 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus BABAM1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le BABAM1 plasmide HDR (h) et le BABAM1 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie BABAM1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles BABAM1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.