AZ1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406801

Panoramica

L’OAZ1 umano codifica l’antizima 1 (AZ1), un importante regolatore negativo del metabolismo delle poliammine che limita i livelli intracellulari di putrescina, spermidina e spermina legandosi all’ornitina decarbossilasi (ODC) e promuovendone la degradazione proteasomiale indipendente dall’ubiquitina. Limitando la biosintesi e il trasporto delle poliammine, AZ1 influenza processi fondamentali quali la progressione del ciclo cellulare, la traduzione e programmi di crescita adattativi allo stress. L’espressione di OAZ1 è regolata in modo stringente da uno slittamento della cornice di lettura ribosomiale (+1) responsivo alle poliammine, formando un circuito di feedback che stabilizza l’omeostasi delle poliammine. Una regolazione alterata delle poliammine che coinvolge OAZ1 è stata associata a stati di segnalazione proliferativa e a dipendenze metaboliche modificate osservate nel cancro e in altre patologie legate alla crescita.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AZ1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene OAZ1 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del OAZ1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto OAZ1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AZ1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di OAZ1 per lo studio della segnalazione di AZ1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni OAZ1 critici per la funzione di AZ1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di OAZ1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AZ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AZ1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus OAZ1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AZ1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AZ1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia OAZ1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio OAZ1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.