Plásmido CRISPR de Activación (h) Axin: sc-401074-ACT

AXIN1 codifica la proteína andamio humana Axin, un componente central del complejo de destrucción de la β-catenina que modula la señalización Wnt canónica mediante interacciones coordinadas con APC, GSK3β y CK1. Al promover la fosforilación de la β-catenina y su degradación por el proteasoma, Axin ayuda a regular programas transcripcionales que controlan la especificación del destino celular, la proliferación y la diferenciación, y también se relaciona con la organización del citoesqueleto y la señalización de respuesta al estrés. La alteración de AXIN1 puede desplazar la salida de la vía Wnt y modificar redes de desarrollo y homeostasis tisular, lo que lo hace relevante para estudios de reconfiguración de la señalización en biología del cáncer y otros contextos de activación aberrante de la vía. Por ello, AXIN1 se utiliza ampliamente como punto de entrada mecanístico para investigar la transcripción dependiente de Wnt/β-catenina y el diálogo cruzado entre vías en modelos celulares humanos.

Axin El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AXIN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Axin El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AXIN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AXIN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Axin. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AXIN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Axin en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Axin en células tumorales con expresión de AXIN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.