ARV1 Plasmide Double Nickase (h): sc-407460-NIC

ARV1 (regolatore dell’omeostasi lipidica ARV1) codifica una proteina multipasso di membrana localizzata nel reticolo endoplasmatico (RE), implicata nell’omeostasi di steroli e sfingolipidi e nell’organizzazione della membrana del RE. ARV1 contribuisce al traffico intracellulare dei lipidi e può influenzare le risposte allo stress del RE e i processi dipendenti dalla composizione di membrana, collegandosi così a vie che regolano il metabolismo lipidico e la gestione delle proteine nel sistema secretorio. Un’alterazione della funzione di ARV1 è stata associata, in studi genetici, a fenotipi di neuro-sviluppo e a crisi epilettiche, in linea con un ruolo dell’equilibrio lipidico nella vitalità neuronale e nella segnalazione. Nei modelli cellulari, la perturbazione di ARV1 può essere utilizzata per indagare come la composizione lipidica del RE influenzi il traffico, la proteostasi e l’adattamento metabolico.

ARV1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ARV1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ARV1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ARV1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ARV1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.