ARHGAP17 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403218-ACT

ARHGAP17 umano codifica una proteina attivatrice della GTPasi Rho (RhoGAP) che downmodula preferenzialmente CDC42 e la segnalazione correlata della famiglia Rho, coordinando il rimodellamento del citoscheletro di actina, la polarità cellulare e il traffico di membrana. Integrando segnali che plasmano l’organizzazione delle giunzioni e la motilità, ARHGAP17 influenza processi quali la regolazione della barriera epiteliale, la migrazione direzionale e le dinamiche endocitiche. Una segnalazione delle GTPasi Rho deregolata che coinvolge ARHGAP17 è stata associata ad alterazioni dell’adesione e a fenotipi invasivi nella biologia dei tumori, nonché a contesti di segnalazione infiammatoria in cui il controllo del citoscheletro influisce sul comportamento delle cellule immunitarie. In quanto nodo nelle reti delle GTPasi Rho, ARHGAP17 è spesso studiato per collegare i recettori a monte alle vie a valle che controllano morfologia, movimento e organizzazione dei tessuti.

ARHGAP17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ARHGAP17 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

ARHGAP17 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ARHGAP17 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ARHGAP17, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di ARHGAP17. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ARHGAP17 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da ARHGAP17 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via ARHGAP17 nelle cellule tumorali con espressione di ARHGAP17 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.