Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
ArgRS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-409431
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- ArgRS Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico ArgRS, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: ArgRS Antibody (ZB-12): sc-100990
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
ArgRS Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-409431 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
RARS codifica l’arginil‑tRNA sintetasi umana (ArgRS), una aminoacil‑tRNA sintetasi citosolica che lega l’arginina al suo tRNA cognato per garantire la fedeltà della traduzione e una sintesi proteica efficiente. ArgRS partecipa alle principali vie del metabolismo dell’RNA e della traduzione e può interfacciarsi funzionalmente con complessi multi‑sintetasi che coordinano la biosintesi proteica con programmi cellulari di stress e di segnalazione. L’alterazione dell’attività delle aminoacil‑tRNA sintetasi è stata collegata a squilibri della proteostasi e a risposte allo stress modificate, rendendo RARS un gene rilevante per studiare i meccanismi che collegano il controllo della traduzione alla vitalità e alla differenziazione cellulare. RARS è inoltre studiato nel contesto di varianti associate a malattia che influenzano la “carica” dei tRNA e gli effetti a valle sulla qualità del proteoma.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ArgRS (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene RARS in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del RARS insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto RARS a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ArgRS.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di RARS per lo studio della segnalazione di ArgRS, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni RARS critici per la funzione di ArgRS
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di RARS per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal ArgRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ArgRS CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus RARS. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal ArgRS Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ArgRS (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia RARS per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio RARS definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.