Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419179

Übersicht

Aqp8 kodiert Aquaporin 8 (AQP8), einen Membrankanal, der einen schnellen Wassertransport ermöglicht und in ausgewählten Zelltypen auch zum transmembranen Transport kleiner neutraler gelöster Stoffe wie Wasserstoffperoxid beitragen kann. In Mausgeweben ist die AQP8-Expression mit der epithelialen Flüssigkeitshandhabung und sekretorischen Physiologie assoziiert; zudem wurde eine subzelluläre Lokalisation sowohl in der Plasmamembran als auch in intrazellulären Membranen beschrieben, was Funktionen bei der osmotischen Balance und der Homöostase von Organellen stützt. Durch die Beeinflussung der Wasserpermeabilität und des Flusses redoxrelevanter gelöster Stoffe steht AQP8 an der Schnittstelle von Prozessen wie epithelialer Barrierefunktion, mitochondrialer Physiologie und Signalwegen des oxidativen Stresses. Eine dysregulierte AQP8-Aktivität oder -Expression wurde im Zusammenhang mit inflammatorischen und metabolischen Phänotypen, Leber- und gastrointestinaler Physiologie sowie allgemeineren Störungen der zellulären Redoxhomöostase untersucht, die für Krankheitsmechanismen relevant sind.

Das Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aqp8-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aqp8-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aqp8 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aquaporin 8/AQP8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aqp8-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aquaporin 8/AQP8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aqp8-Exone abzielen, die für die Aquaporin 8/AQP8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aqp8-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Aquaporin 8/AQP8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aqp8-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aquaporin 8/AQP8 HDR-Plasmid (m) und Aquaporin 8/AQP8 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aqp8-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aqp8-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.