Aquaporin 5/AQP5 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400567

Descripción general

AQP5 codifica la acuaporina 5, un canal de agua de membrana que facilita el transporte rápido y selectivo de agua a través de la membrana plasmática en tejidos epiteliales. En epitelios secretores de las vías respiratorias, las glándulas salivales y lagrimales, y los alvéolos pulmonares, AQP5 contribuye a la homeostasis de fluidos y a la hidratación de las mucosas y a la fisiología de la barrera al regular el movimiento transepitelial de agua. Su actividad se integra con las respuestas al estrés osmótico, el transporte iónico epitelial y la organización de las uniones celulares, que en conjunto determinan la capa líquida de la superficie de las vías aéreas y la secreción glandular. La expresión o localización desregulada de AQP5 se ha asociado con disfunción epitelial en afecciones inflamatorias de las vías respiratorias, hipofunción de las glándulas salivales y alteraciones del manejo del agua en la fisiopatología pulmonar, lo que la hace relevante para estudios mecanísticos de la secreción y el remodelado epitelial.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Aquaporin 5/AQP5 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AQP5 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AQP5 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AQP5 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Aquaporin 5/AQP5.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AQP5 para la investigación de la señalización de Aquaporin 5/AQP5, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AQP5 críticos para la función de Aquaporin 5/AQP5
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AQP5 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Aquaporin 5/AQP5 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AQP5. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Aquaporin 5/AQP5 (h) y el plásmido HDR Aquaporin 5/AQP5 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AQP5 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AQP5 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.