APNG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435240

Panoramica

Il gene Mpg del topo codifica la DNA N-glicosilasi delle alchilpurine (APNG), un enzima della riparazione per escissione di basi (BER) che riconosce ed escide una gamma di lesioni puriniche alchilate e deaminate, tra cui 3-metiladenina e ipoxantina. Avviando la rimozione delle basi danneggiate, APNG contribuisce a mantenere la fedeltà della replicazione e a limitare la mutagenesi derivante dal metabolismo endogeno e da genotossine ambientali. L’attività di APNG si integra con i principali fattori della BER, quali APEX1, POLβ e XRCC1, per completare l’elaborazione della lesione e il ripristino del filamento. Alterazioni della funzione di MPG/APNG sono state associate a fenotipi di instabilità genomica rilevanti per la ricerca sulla carcinogenesi e alla sensibilità allo stress da alchilazione del DNA in modelli cellulari e murini.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO APNG (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Mpg in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Mpg insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Mpg a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina APNG.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Mpg per lo studio della segnalazione di APNG, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Mpg critici per la funzione di APNG
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Mpg per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal APNG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal APNG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Mpg. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal APNG Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR APNG (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Mpg per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Mpg definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.