APC8 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406761

Übersicht

CDC23 kodiert APC8, eine zentrale Untereinheit des Anaphase-Promoting-Complex/Cyclosoms (APC/C), einer E3-Ubiquitin-Ligase, die den mitotischen Verlauf und den Austritt aus dem Zellzyklus steuert, indem sie Schlüsselregulatoren wie Securin und Cycline für den proteasomalen Abbau markiert. APC8 trägt zur Assemblierung des APC/C und zur Substraterkennung bei und integriert Checkpoint-Signale, um eine korrekte Trennung der Schwesterchromatiden und die Aufrechterhaltung der Genomstabilität zu gewährleisten. Über seine Rolle in der ubiquitinvermittelten Proteolyse ist CDC23 mit Signalwegen verknüpft, die die Spindelkontrollpunkt-Kontrolle, das Timing der Mitose und geordnete Übergänge durch G2/M und die Anaphase regulieren. Eine Fehlregulation von APC/C-Komponenten und den zugehörigen Mechanismen der Zellzykluskontrolle wird häufig mit proliferativen Erkrankungen und aneuploidiebezogenen Phänotypen in Verbindung gebracht, wodurch CDC23/APC8 ein relevantes Ziel für mechanistische Studien zu Defekten der Zellteilung darstellt.

Das APC8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des CDC23-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des CDC23-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von CDC23 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die APC8-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von CDC23-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der APC8-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf CDC23-Exone abzielen, die für die APC8-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere CDC23-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom APC8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom APC8 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des CDC23-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das APC8 HDR-Plasmid (h) und APC8 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von CDC23-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten CDC23-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.