Plasmide Double Nickase (m) APC: sc-419146-NIC

Le gène murin **Apc** code le suppresseur de tumeur **APC**, une protéine d'échafaudage multifonctionnelle qui freine la signalisation canonique **Wnt/β‑caténine** en favorisant le renouvellement de la β‑caténine via le complexe de destruction comprenant **AXIN**, **GSK3β** et **CK1**. Au-delà de la régulation de Wnt, APC contribue à l'organisation du cytosquelette, à la polarité cellulaire et à la dynamique des microtubules, influençant des processus tels que la progression mitotique et la migration directionnelle. La perturbation des fonctions d'APC, tant dans la signalisation que dans le contrôle du cytosquelette, est fortement associée à une prolifération aberrante et à des défauts d'homéostasie intestinale dans des systèmes modèles, faisant d'**Apc** un nœud central pour étudier les voies qui couplent des programmes transcriptionnels à l'architecture tissulaire. Ces propriétés font d'**Apc** un déterminant génétique majeur pour analyser les sorties de la voie Wnt, la différenciation épithéliale et les relations génotype–phénotype dans des cellules de souris.

APC Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Apc dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Apc. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Apc. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Apc.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.