APC Plasmide Double Nickase (h): sc-400374-NIC

APC codifica per adenomatous polyposis coli, un soppressore tumorale multifunzionale che funge da piattaforma per l'assemblaggio del complesso di distruzione della β-catenina e, di conseguenza, regola la segnalazione Wnt canonica e i programmi trascrizionali che controllano proliferazione e differenziamento. Oltre al controllo della via Wnt, APC coordina la dinamica del citoscheletro, la polarità cellulare e la segregazione dei cromosomi attraverso interazioni con i microtubuli, fattori associati all'actina e componenti del cinetocore. L'alterazione della funzione di APC è fortemente associata a una stabilizzazione aberrante della β-catenina, a decisioni di destino cellulare alterate e a instabilità genomica, rendendo APC un nodo centrale per lo studio dell'omeostasi dell'epitelio intestinale e dei meccanismi di segnalazione oncogenica. APC umano è quindi ampiamente utilizzato per analizzare il rimodellamento delle vie di segnalazione in modelli di carcinoma colorettale e di fenotipi correlati guidati da Wnt.

APC Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus APC nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di APC. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di APC. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con APC interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.