Plasmide Double Nickase (h) APC: sc-400374-NIC

APC code pour l'« adenomatous polyposis coli », un suppresseur de tumeur multifonctionnel qui sert de plateforme au complexe de destruction de la β-caténine et régule ainsi la signalisation Wnt canonique ainsi que les programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération et la différenciation. Au-delà du contrôle de la voie Wnt, APC coordonne la dynamique du cytosquelette, la polarité cellulaire et la ségrégation des chromosomes via des interactions avec les microtubules, des facteurs associés à l'actine et des composants du kinétochore. La perturbation de la fonction d'APC est fortement liée à une stabilisation aberrante de la β-caténine, à des décisions de destinée cellulaire altérées et à une instabilité génomique, faisant d'APC un nœud central pour l'étude de l'homéostasie de l'épithélium intestinal et des mécanismes de signalisation oncogénique. APC humain est donc largement utilisé pour analyser le remodelage des voies de signalisation dans des modèles de cancer colorectal et d'autres phénotypes dépendants de Wnt.

APC Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus APC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de APC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de APC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de APC.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.