AP4A Hydrolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド (r): sc-437371

概要

AP4Aヒドロラーゼは、ヌクレオチド代謝に関与する酵素であり、細胞ストレス時に量が増加する、アラーモン様の多機能シグナル分子であるジアデノシン四リン酸（Ap4A）を加水分解します。Ap4Aのターンオーバーを制御することで、この酵素はヌクレオチド恒常性に寄与し、ストレス適応、レドックスバランス、核酸結合タンパク質の制御に関連する下流プロセスにも影響を与えます。Ap4A代謝の変化は、細胞増殖、炎症性シグナル伝達、神経機能の変化と関連づけられており、AP4Aヒドロラーゼは、ラットモデルにおける心代謝、神経生物学、免疫関連の表現型の機序研究において重要です。その活性は、ジヌクレオチド系のセカンドメッセンジャーが調節因子として働く、RNA/DNAプロセシングおよび細胞ストレス応答を司る経路群と広範に交差しています。

AP4A Hydrolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）は、rat細胞株における遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、AP4A Hydrolaseタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、AP4A Hydrolaseシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• AP4A Hydrolaseの機能に不可欠なエクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• AP4A Hydrolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r）およびAP4A Hydrolase CRISPR/Cas9 KOプラスミド（r2）によってコードされるgRNAは、遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  AP4A Hydrolase HDRプラスミド（r）および AP4A Hydrolase HDRプラスミド（r2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定の標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。