Plasmide CRISPR/Cas9 KO Antiquitin (h): sc-417902

Présentation

ALDH7A1 code l’antiquitine, une aldéhyde déshydrogénase dépendante du NAD+ qui participe au catabolisme de la lysine en oxydant le semi-aldéhyde α-aminoadipique et d’autres aldéhydes réactifs apparentés. En détoxifiant des intermédiaires aldéhydes, l’antiquitine contribue à l’homéostasie redox cellulaire et limite l’accumulation de métabolites électrophiles susceptibles de perturber les voies métaboliques et de réponse au stress. Des variants entraînant une perte de fonction sont associés à l’épilepsie dépendante de la pyridoxine, ce qui reflète une perturbation de la dégradation de la lysine et des effets secondaires sur la disponibilité de la vitamine B6/PLP et le métabolisme des neurotransmetteurs. ALDH7A1 constitue donc une cible utile pour étudier le couplage métabolique mitochondrie–cytosol, la biologie du stress lié aux aldéhydes et les erreurs innées du métabolisme dans des modèles cellulaires humains.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Antiquitin (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ALDH7A1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ALDH7A1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ALDH7A1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Antiquitin.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ALDH7A1 pour l'étude de la signalisation de Antiquitin, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ALDH7A1 essentiels à la fonction de Antiquitin
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ALDH7A1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Antiquitin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Antiquitin plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ALDH7A1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Antiquitin plasmide HDR (h) et le Antiquitin (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ALDH7A1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ALDH7A1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.