Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Annexin VI Double Nickase Plasmid (h): sc-401791-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Annexin VI Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Annexin VI Double-Nickase-Plasmid (h) und Annexin VI Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ANXA6 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Annexin VI: sc-271859
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Annexin VI Double Nickase Plasmid (h) | sc-401791-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Annexin VI Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401791-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane ANXA6 kodiert Annexin VI, ein Ca2+-abhängiges, phospholipidbindendes Scaffold-Protein, das mit der inneren Membranblattseite zellulärer Membranen assoziiert und Membrantransport, Exozytose/Endozytose sowie die Dynamik des Zytoskeletts koordiniert. Annexin VI ist an der Kalziumsignalgebung und der Organisation von Membran-Mikrodomänen beteiligt und beeinflusst dadurch Rezeptorumsatz sowie Signaltransduktionswege, die von reguliertem Vesikeltransport abhängen. Über seine Rollen in endosomaler Sortierung und Membran‑Zytoskelett‑Kopplung wurde es zudem mit Prozessen wie Cholesterinhomöostase und Zellmigration in Verbindung gebracht. Veränderte ANXA6-Expression oder -Lokalisation wurde in Kontexten wie der Krebsbiologie und kardiovaskulär relevanten zellulären Phänotypen berichtet, was es für mechanistische Studien membranabhängiger Signalnetzwerke relevant macht.
Annexin VI Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ANXA6-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ANXA6 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ANXA6-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ANXA6-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.