Annexin V CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419117

Übersicht

Das murine Gen **Anxa5** kodiert **Annexin V**, ein Ca²⁺-abhängiges phospholipidbindendes Protein, das mit der inneren Schicht zellulärer Membranen assoziiert und rasch an Orte der Membranumbauprozesse rekrutiert wird. Annexin V trägt zur Membranreparatur, zum Vesikeltransport und zur Regulation der Zytoskelettdynamik bei und wird breit als molekularer Marker für die Exposition von Phosphatidylserin während der Apoptose eingesetzt. Über seine Interaktionen mit anionischen Phospholipiden beeinflusst Annexin V calciumsignal-gekoppelte Prozesse und kann entzündungs- sowie gerinnungsrelevante membranassoziierte Ereignisse modulieren. Eine veränderte Expression oder Lokalisation von **ANXA5** wurde mit dysregulierten Zelltodantworten und Kontexten von Gewebeschädigung in Verbindung gebracht, was seine Untersuchung in Modellen der Immunaktivierung, der kardiovaskulären Biologie und des Krebszellstresses unterstützt.

Das Annexin V CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Anxa5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Anxa5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Anxa5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Annexin V-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Anxa5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Annexin V-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Anxa5-Exone abzielen, die für die Annexin V-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Anxa5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Annexin V CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Annexin V CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Anxa5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Annexin V HDR-Plasmid (m) und Annexin V HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Anxa5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Anxa5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.