Ankyrin G Double Nickase Plasmid (h): sc-400421-NIC

ANK3 kodiert Ankyrin G, ein membranassoziiertes Adapterprotein, das verschiedene Ionenkanäle und Zelladhäsionsmoleküle mit dem Spektrin‑Aktin‑Zytoskelett verbindet und spezialisierte Membrandomänen wie das Axoninitialsegment und die Ranvier'schen Schnürringe organisiert. Durch die Regulation der Kanal-Clusterbildung und des Scaffoldings an erregbaren Membranen beeinflusst Ankyrin G die neuronale Polarität, die Auslösung von Aktionspotenzialen und die synaptische Stabilität; außerdem trägt es zur Integrität epithelialer Zell‑Zell‑Junctions bei. ANK3-assoziierte Störungen wurden mit der Genetik neuropsychiatrischer Erkrankungen und mit veränderter Funktion neuronaler Netzwerke in Verbindung gebracht, was seine Nutzung als mechanistischer Knotenpunkt in Studien zu Erregbarkeit, Schaltkreisentwicklung und zytoskelettaler Organisation unterstützt. Diese Eigenschaften machen ANK3 zu einem relevanten Ziel, um Signalwege zu untersuchen, die den Transport von Membranproteinen, die Verankerung am Zytoskelett und die Zellsignalgebung in spezialisierten subzellulären Kompartimenten steuern.

Ankyrin G Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ANK3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ANK3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ANK3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.

Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ANK3-Störung.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.