Angptl4 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401369-ACT

ANGPTL4 codifica l’angiopoietin-like 4 (Angptl4), una glicoproteina secreta indotta da segnali legati ai nutrienti e all’ossigeno, che modula la gestione dei lipidi e la biologia vascolare. Angptl4 inibisce la lipoproteina lipasi per regolare il metabolismo delle lipoproteine ricche di trigliceridi e si integra con programmi metabolici controllati dalla segnalazione PPAR, collegando le risposte del tessuto adiposo e del fegato al digiuno e all’infiammazione. Nell’ambiente extracellulare può influenzare il comportamento endoteliale, la funzione di barriera e il rimodellamento della matrice extracellulare, connettendo lo stato metabolico all’omeostasi tissutale. Un’espressione disregolata di ANGPTL4 è stata associata a disturbi metabolici, microambienti infiammatori e processi correlati ai tumori, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul flusso lipidico e sulle risposte vascolari.

Angptl4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di ANGPTL4 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

Angptl4 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus ANGPTL4 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione ANGPTL4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di Angptl4. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus ANGPTL4 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da Angptl4 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via Angptl4 nelle cellule tumorali con espressione di ANGPTL4 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.