Plásmido CRISPR de Activación (h) Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1: sc-400229-ACT

AGTR1 codifica el receptor de angiotensina II tipo 1 (AT1), un GPCR de siete dominios transmembrana que media la mayor parte de la señalización canónica de la angiotensina II en tejidos cardiovasculares y renales. Tras la unión del ligando, AT1 se acopla predominantemente a Gq/11 para activar la fosfolipasa C, la movilización de calcio y la PKC, y también puede activar vías MAPK/ERK, JAK/STAT y rutas generadoras de ROS, así como una señalización dependiente de β-arrestina que modula la desensibilización y el tráfico del receptor. Estas cascadas regulan la vasoconstricción, la secreción de aldosterona, la homeostasis de sodio y agua, el remodelado vascular, la inflamación y la fibrosis. La actividad y la expresión desreguladas de AGTR1 se han implicado en la hipertensión, la hipertrofia cardíaca, procesos ateroscleróticos y el remodelado asociado a la enfermedad renal crónica, lo que lo convierte en un nodo ampliamente estudiado en la biología de la vía del SRAA.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de AGTR1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus AGTR1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional AGTR1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo AGTR1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Angiotensin Receptor/AT1/AGTR1 en células tumorales con expresión de AGTR1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.