Amylase 2a Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400533

Descripción general

AMY2A codifica la α‑amilasa pancreática 2A, una hidrolasa secretada que inicia la degradación del almidón y el glucógeno de la dieta al escindir enlaces glucosídicos α‑1,4 para generar maltosa y oligosacáridos. Como parte del programa de enzimas pancreáticas exocrinas, la amilasa 2a contribuye al metabolismo digestivo y se regula en procesos de diferenciación de las células acinares y de la vía secretora, incluido el tráfico RE/Golgi y la liberación de enzimas acoplada a estímulos. La alteración de la expresión o la actividad de la amilasa se utiliza como lectura molecular de la función exocrina del páncreas y se examina con frecuencia en contextos de inflamación pancreática y trastornos pancreáticos donde la homeostasis de las células acinares está perturbada. AMY2A también sirve como marcador en estudios sobre la identidad de las células acinares, las respuestas al estrés y la regulación de genes de enzimas digestivas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Amylase 2a (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen AMY2A en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del AMY2A junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de AMY2A tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Amylase 2a.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en AMY2A para la investigación de la señalización de Amylase 2a, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de AMY2A críticos para la función de Amylase 2a
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de AMY2A para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Amylase 2a CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Amylase 2a CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus AMY2A. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Amylase 2a (h) y el plásmido HDR Amylase 2a (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología AMY2A para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana AMY2A definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.