Plásmido CRISPR de Activación (h) AMPKγ2: sc-404970-ACT

PRKAG2 codifica la subunidad reguladora AMPKγ2 de la proteína quinasa activada por AMP (AMPK), un sensor energético central que vincula el estado celular de AMP/ATP con la adaptación metabólica. Al modular el ensamblaje del complejo AMPK y la detección de nucleótidos, AMPKγ2 influye en vías downstream que controlan la captación de glucosa, la oxidación de ácidos grasos, la biogénesis mitocondrial y la autofagia a través de nodos de señalización como mTORC1 y ULK1. PRKAG2 es altamente relevante para la bioenergética del músculo cardíaco y esquelético, donde una señalización alterada de AMPK puede cambiar la utilización de sustratos y las respuestas al estrés. La variación genética o la desregulación de PRKAG2 se ha asociado con fenotipos de conducción cardíaca e hipertrofia, lo que respalda su uso en estudios mecanísticos del remodelado metabólico y electrofisiológico.

AMPKγ2 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de PRKAG2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

AMPKγ2 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus PRKAG2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional PRKAG2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de AMPKγ2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo PRKAG2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de AMPKγ2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía AMPKγ2 en células tumorales con expresión de PRKAG2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.