Plasmide CRISPR d'Activation (h) AMPKγ2: sc-404970-ACT

PRKAG2 code pour la sous-unité régulatrice AMPKγ2 de la protéine kinase activée par l’AMP (AMPK), un capteur central de l’énergie qui couple l’état AMP/ATP cellulaire à l’adaptation métabolique. En modulant l’assemblage du complexe AMPK et la détection des nucléotides, AMPKγ2 influence des voies en aval qui contrôlent l’absorption du glucose, l’oxydation des acides gras, la biogenèse mitochondriale et l’autophagie via des nœuds de signalisation tels que mTORC1 et ULK1. PRKAG2 est particulièrement pertinent pour la bioénergétique du muscle cardiaque et du muscle squelettique, où une signalisation AMPK altérée peut modifier l’utilisation des substrats et les réponses au stress. Des variations génétiques ou une dysrégulation de PRKAG2 ont été associées à des phénotypes de troubles de la conduction cardiaque et d’hypertrophie, ce qui étaye son utilisation dans des études mécanistiques du remodelage métabolique et électrophysiologique.

AMPKγ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PRKAG2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

AMPKγ2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PRKAG2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PRKAG2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de AMPKγ2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PRKAG2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de AMPKγ2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie AMPKγ2 dans les cellules tumorales présentant une expression de PRKAG2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.