AMDHD2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-434174

Descripción general

Amdhd2 codifica la proteína amidohidrolasa con dominio 2 (AMDHD2), una desacetilasa citosólica dependiente de metales que participa en el metabolismo de los aminoazúcares al catalizar pasos de desacetilación vinculados al uso de N-acetilglucosamina (GlcNAc). A través de su papel en el procesamiento de intermediarios derivados de la glucosamina, AMDHD2 puede influir en la detección celular de nutrientes y en vías conectadas al flujo de la hexosamina, que se cruza con la capacidad de glicosilación y la homeostasis metabólica. La regulación alterada del metabolismo de los aminoazúcares se ha asociado con cambios en la proliferación, las respuestas al estrés y los programas de diferenciación en células de mamífero. En modelos de ratón, la perturbación de Amdhd2 ofrece un punto de entrada genético para estudiar cómo el metabolismo relacionado con GlcNAc contribuye a la fisiología tisular y a fenotipos metabólicos relevantes para la enfermedad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AMDHD2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Amdhd2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Amdhd2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Amdhd2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AMDHD2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Amdhd2 para la investigación de la señalización de AMDHD2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Amdhd2 críticos para la función de AMDHD2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Amdhd2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AMDHD2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AMDHD2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Amdhd2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AMDHD2 (m) y el plásmido HDR AMDHD2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Amdhd2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Amdhd2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.