AMBP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419097

Descripción general

Ambp codifica la proteína precursora AMBP, que se procesa proteolíticamente para generar alfa-1-microglobulina y la cadena pesada 4 del inhibidor inter-alfa-tripsina (ITIH4). La alfa-1-microglobulina actúa como un eliminador (scavenger) de unión al hemo y con actividad redox, que ayuda a limitar el estrés oxidativo y carbonílico, mientras que ITIH4 se asocia con la dinámica de la matriz extracelular y con las respuestas inflamatorias de fase aguda. En biología del ratón, los productos derivados de AMBP se estudian comúnmente en el contexto de la señalización del estrés sistémico, las redes de proteínas secretadas enriquecidas en hígado y la remodelación vinculada a proteasas e inflamación. La desregulación de estas vías es relevante para investigaciones sobre inflamación, lesión tisular y fenotipos asociados al estrés oxidativo, sin implicar resultados clínicos.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AMBP (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ambp en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ambp junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ambp tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AMBP.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ambp para la investigación de la señalización de AMBP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Ambp críticos para la función de AMBP
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ambp para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AMBP CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AMBP CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ambp. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AMBP (m) y el plásmido HDR AMBP (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ambp para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ambp definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.