alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 Double Nickaseプラスミド (h): sc-416366-NIC

ATP1A3は、Na⁺/K⁺-ATPaseのα3触媒サブユニットをコードしています。Na⁺/K⁺-ATPaseはP型ATPaseの一種で、ATP加水分解のエネルギーを用いて細胞内のNa⁺を細胞外のK⁺と交換し、膜電位とイオン勾配を維持します。このポンプは、神経細胞の興奮性、活動電位後の回復、ならびにイオン勾配を神経伝達物質の取り込みや細胞容積調節に結び付ける二次性能動輸送過程を支えます。ATP1A3の活性は、興奮性組織における電気化学的恒常性、シナプス伝達、代謝需要に対するストレス応答を制御する経路と連関しています。ATP1A3の遺伝学的・機能的な異常は神経疾患の表現型と関連しており、イオン輸送の機能不全と神経回路レベルの影響を解明する機序研究の重要な標的となっています。

alpha 3 Sodium Potassium ATPase/ATP1A3 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ATP1A3 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ATP1A3内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ATP1A3の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ATP1A3が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。