Plasmide Double Nickase (m) ALK-1: sc-418978-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) ALK-1 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide ALK-1 Double Nickase (m) et le plasmide ALK-1 Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Acvrl1. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: ALK-1 Antibody (RM0015-1B03): sc-101556
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) ALK-1 | sc-418978-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) ALK-1 | sc-418978-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Acvrl1 code la kinase 1 de type récepteur apparentée au récepteur de l’activine (ALK-1), un récepteur kinase sérine/thréonine de type I de la superfamille TGF-β/BMP, fortement enrichi dans les cellules endothéliales et essentiel à la morphogenèse vasculaire et au maintien de l’homéostasie vasculaire. Après liaison de BMP9 ou BMP10 en complexe avec des récepteurs de type II, ALK-1 phosphoryle SMAD1/5/9 afin de réguler des programmes transcriptionnels qui contrôlent le bourgeonnement angiogénique, la prolifération endothéliale et la maturation des vaisseaux. Cet axe de signalisation s’intègre aux voies VEGF et Notch pour ajuster finement la spécification artério-veineuse et la fonction de barrière. Une activité ACVRL1/ALK-1 dérégulée est associée à des malformations vasculaires héréditaires et à des phénotypes hémorragiques, ce qui en fait un nœud clé pour les études mécanistiques de l’angiogenèse et de la signalisation endothéliale.
ALK-1 Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Acvrl1 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Acvrl1. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Acvrl1. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Acvrl1.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.