Plásmido Doble Nickase (h) Aldolase C: sc-400988-NIC

El ALDOC humano codifica la aldolasa C, una enzima glucolítica que cataliza la escisión reversible de la fructosa-1,6-bisfosfato en fosfatos de triosa, conectando el metabolismo de los carbohidratos con la producción celular de ATP y el flujo biosintético. La aldolasa C está enriquecida en el sistema nervioso central y se utiliza con frecuencia como marcador del estado metabólico neuronal y glial, con funciones que se relacionan con la glucólisis, la homeostasis energética y el equilibrio redox. La alteración de la expresión de ALDOC y la reprogramación metabólica se han asociado con disfunción neurológica y también se han observado en distintos contextos tumorales, donde la remodelación de la vía glucolítica favorece la proliferación y la adaptación al estrés. Como nodo metabólico, ALDOC ofrece un punto de entrada abordable para estudiar la señalización dependiente de la glucólisis, las respuestas celulares al estrés y la regulación específica de tejido del metabolismo energético.

Aldolase C El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ALDOC en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ALDOC. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ALDOC. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ALDOC alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.