Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419080

Übersicht

Aldh3a1 codiert die Aldehyddehydrogenase 3-A1 (ALDH3A1), ein NAD(P)+-abhängiges Enzym, das reaktive aliphatische und aromatische Aldehyde oxidiert, die während der Lipidperoxidation und des Xenobiotika-Stoffwechsels entstehen. Durch die Entgiftung elektrophiler Aldehyde und seinen Beitrag zur Redox-Homöostase unterstützt ALDH3A1 die zellulären Abwehrmechanismen gegen oxidativen und Carbonyl-Stress und ist mit glutathiongekoppelten Stressantwortwegen verknüpft. In Mausgeweben wurde ALDH3A1-Aktivität mit dem Schutz epithelialer Kompartimente in Verbindung gebracht, die Umwelt- und Stoffwechselbelastungen ausgesetzt sind, was Studien zu Entzündung, altersassoziiertem Stress und Karzinogenese, bei denen die Aldehydbelastung erhöht ist, unterstützt. Eine veränderte Funktion der ALDH-Familie wird aufgrund ihres Einflusses auf Entgiftungskapazität und zelluläre Stresstoleranz häufig in Modellen für Stoffwechselstörungen und Tumorbiologie untersucht.

Das Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aldh3a1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aldh3a1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aldh3a1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aldh3a1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aldh3a1-Exone abzielen, die für die Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aldh3a1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aldh3a1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 HDR-Plasmid (m) und Aldehyde dehydrogenase 3-A1/ALDH3A1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aldh3a1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aldh3a1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.