Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-419078

Übersicht

Aldh1a1 kodiert die Aldehd-Dehydrogenase 1-A1 (ALDH1A1), ein zytosolisches, NAD(P)+-abhängiges Enzym, das ein breites Spektrum endogener und xenobiotischer Aldehyde zu den entsprechenden Carbonsäuren oxidiert und dadurch zur zellulären Entgiftung sowie zur Redoxhomöostase beiträgt. In Mausgeweben ist ALDH1A1 an der Retinoidstoffwechsel beteiligt, indem es Retinaldehyd zu Retinsäure umsetzt, und verknüpft das Gen damit mit Transkriptionsprogrammen, die Differenzierung, Stoffwechsel und Antworten auf oxidativen Stress beeinflussen. Die ALDH1A1-Aktivität überschneidet sich mit Signalwegen der Lipidperoxidation und der Eliminierung reaktiver Aldehyde und hilft, Carbonylstress sowie die nachfolgende Bildung von Protein- und DNA-Addukten zu begrenzen. Eine veränderte ALDH1A1-Expression oder -Funktion wurde mit Phänotypen in Zusammenhang gebracht, die mit oxidativem Stress verbunden sind, und wird häufig in Kontexten wie metabolischer Dysregulation, Neurobiologie und Tumorzellbiologie als Marker des zellulären Zustands untersucht.

Das Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Aldh1a1-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Aldh1a1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Aldh1a1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Aldh1a1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Aldh1a1-Exone abzielen, die für die Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Aldh1a1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Aldh1a1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 HDR-Plasmid (m) und Aldehyde dehydrogenase 1-A1/ALDH1A1 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Aldh1a1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Aldh1a1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.