Akt1 Plasmide Double Nickase (h): sc-400014-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Akt1 Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Akt1 Double Nickase Plasmid (h) e il Akt1 Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira AKT1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Akt1 Antibody (G-5): sc-55523
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Akt1 Plasmide Double Nickase (h) | sc-400014-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Akt1 Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400014-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
AKT1 codifica la chinasi serina/treonina Akt1, un effettore centrale della segnalazione PI3K che integra gli input di fattori di crescita e dell’insulina per regolare la sopravvivenza cellulare, la proliferazione, il metabolismo e la sintesi proteica. Akt1 fosforila numerosi substrati coinvolti nel controllo dell’apoptosi, della progressione del ciclo cellulare e della traduzione mediata da mTORC1, e coordina le risposte cellulari allo stress ossidativo e alla disponibilità di nutrienti. Una segnalazione di AKT1 deregolata è associata alla trasformazione oncogenica e alla resistenza alle terapie; un’alterata attività di Akt1 è stata inoltre implicata in fenotipi metabolici e del neurosviluppo. Nelle cellule umane, le perturbazioni della via di AKT1 sono spesso studiate nel contesto dell’attivazione dei recettori tirosina-chinasici, della perdita di PTEN e dei nodi di segnalazione a valle FOXO, GSK3 e TSC2.
Akt1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AKT1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AKT1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AKT1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AKT1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.