AKR1B10 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-403649-ACT

AKR1B10 codifica un’aldo-cheto reduttasi umana NADPH-dipendente che riduce carbonili reattivi e aldeidi derivate dalla perossidazione lipidica, contribuendo all’omeostasi redox cellulare e alla detossificazione. Modulando il metabolismo dei retinoidi e dei lipidi e tamponando lo stress ossidativo, AKR1B10 influenza programmi di proliferazione, differenziazione e segnalazione infiammatoria. Un’espressione deregolata di AKR1B10 è stata riportata in molteplici contesti tumorali e in condizioni associate a stress metabolico e ossidativo, in cui una gestione alterata dei carbonili può rimodellare la fitness cellulare. Di conseguenza, AKR1B10 è spesso studiato come nodo di collegamento tra la risposta agli xenobiotici, il rimodellamento lipidico e le vie di adattamento allo stress.

AKR1B10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AKR1B10 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

AKR1B10 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AKR1B10 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AKR1B10, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di AKR1B10. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AKR1B10 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da AKR1B10 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via AKR1B10 nelle cellule tumorali con espressione di AKR1B10 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.