AID Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401542-ACT

A AICDA humana codifica a desaminase de citidina induzida por ativação (AID), uma enzima de edição de DNA/RNA que catalisa a desaminação de citidina para uridina em DNA de fita simples durante a transcrição. A AID é essencial para a diversificação de anticorpos por meio de hipermutação somática e recombinação de troca de classe em células B do centro germinativo, ligando sua atividade a processos de reparo de DNA, incluindo o reparo por excisão de base e o reparo de incompatibilidades (mismatch repair). Uma regulação rigorosa da AID é necessária para limitar a mutagênese fora do alvo, pois a expressão desregulada ou ectópica pode aumentar a instabilidade genômica e contribuir para translocações cromossômicas e acúmulo de mutações. Assim, a AICDA é amplamente estudada em vias que regulam a imunidade adaptativa, a diferenciação de células B e mecanismos de transformação oncogênica impulsionada por mutações.

AID O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AICDA sem alterar a sequência de ADN subjacente.

AID O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AICDA em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AICDA, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de AID. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AICDA nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de AID no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via AID em células tumorais com expressão de AICDA silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.