Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Agrin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401256
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Agrin Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico Agrin, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Agrin Antibody (D-2): sc-374117
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Agrin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401256 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
AGRN codifica l’agrina, un grande proteoglicano eparan-solfato della matrice extracellulare che organizza la segnalazione cellula–matrice e la specializzazione della membrana. In contesti neuromuscolari e neuronali, l’agrina coordina la formazione e la stabilizzazione delle sinapsi interagendo con recettori quali LRP4 e attivando una segnalazione dipendente da MuSK, sostenendo il clustering dei recettori dell’acetilcolina e la maturazione sinaptica. Oltre alla sinaptogenesi, l’agrina influenza il rimodellamento del citoscheletro, l’adesione e la meccanotrasduzione attraverso interazioni con distroglicano e integrine, contribuendo a modellare l’architettura dei tessuti. Un’espressione o un processamento deregolati di AGRN sono stati associati a difetti della giunzione neuromuscolare e ad alterazioni dell’omeostasi sinaptica, e il gene è anche oggetto di studio in vie legate a fibrosi, neurodegenerazione e rimodellamento del microambiente tumorale.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Agrin (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AGRN in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AGRN insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AGRN a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Agrin.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AGRN per lo studio della segnalazione di Agrin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni AGRN critici per la funzione di Agrin
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AGRN per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal Agrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal Agrin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AGRN. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal Agrin Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR Agrin (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AGRN per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AGRN definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.