AFX1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402408-NIC

FOXO4 (AFX1) è un fattore di trascrizione della famiglia forkhead box O che integra la segnalazione insulinica/IGF-1, la dinamica di fosforilazione PI3K–AKT e vie di risposta allo stress per regolare geni che controllano l'arresto del ciclo cellulare, l'apoptosi, la resistenza allo stress ossidativo e il metabolismo. La sua attività è modulata da modificazioni post-traduzionali che influenzano lo shuttling nucleo–citoplasma e il legame al DNA, plasmando così programmi trascrizionali associati all'omeostasi cellulare. FOXO4 partecipa al crosstalk di rete con le vie di segnalazione MAPK, AMPK e TGF-β e può influenzare l'accessibilità della cromatina tramite il reclutamento di cofattori. Una segnalazione di FOXO4 deregolata è stata associata ad alterazioni della proliferazione e dell'adattamento allo stress nella biologia dei tumori, nonché a meccanismi di senescenza cellulare e invecchiamento dei tessuti.

AFX1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FOXO4 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FOXO4. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FOXO4. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FOXO4 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.