AdSS2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419031

Visão geral

Adss codifica a adenilossuccinato sintase 2 (AdSS2), uma enzima-chave na biossíntese de purinas de novo que catalisa a conversão de IMP em adenilossuccinato, sustentando a produção de AMP e o equilíbrio de nucleotídeos celulares. Ao controlar a disponibilidade de nucleotídeos de adenina, a AdSS2 influencia a síntese de DNA/RNA, o metabolismo energético e a capacidade proliferativa, além de se integrar a programas metabólicos que acoplam o fluxo de purinas à progressão do ciclo celular. A perturbação de enzimas da biossíntese de purinas está associada a fenótipos de crescimento alterados e respostas ao estresse, tornando a AdSS2 relevante para estudos de reprogramação metabólica em biologia do câncer e em outros contextos em que a demanda por nucleotídeos é elevada. Em modelos murinos, Adss oferece um ponto de estudo acessível para dissecar como o suprimento de purinas limita a biossíntese e vias de sinalização dependentes de nucleotídeos de adenina.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO AdSS2 (m) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene Adss em linhas celulares mouse. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do Adss, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do Adss na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína AdSS2.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de Adss para a investigação da sinalização de AdSS2, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) Adss críticos para a função AdSS2
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos Adss para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo AdSS2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m) e pelo AdSS2 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (m2) têm como alvo locais distintos dentro do locus Adss. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo AdSS2 Plasmídeo HDR (m) e o Plasmídeo HDR AdSS2 (m2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia Adss para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo Adss definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.