AdSS2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-419031

Descripción general

Adss codifica la adenilosuccinato sintasa 2 (AdSS2), una enzima clave de la biosíntesis de novo de purinas que cataliza la conversión de IMP a adenilosuccinato, favoreciendo la producción de AMP y el equilibrio de nucleótidos celulares. Al controlar la disponibilidad de nucleótidos de adenina, AdSS2 influye en la síntesis de ADN/ARN, el metabolismo energético y la capacidad proliferativa, y se integra con programas metabólicos que acoplan el flujo de purinas a la progresión del ciclo celular. La alteración de enzimas de la biosíntesis de purinas se asocia con fenotipos de crecimiento modificados y respuestas al estrés, lo que hace que AdSS2 sea relevante para estudios de reprogramación metabólica en biología del cáncer y en otros contextos donde la demanda de nucleótidos es elevada. En modelos murinos, Adss constituye un nodo accesible para analizar cómo el suministro de purinas limita la biosíntesis y las vías de señalización dependientes de nucleótidos de adenina.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO AdSS2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Adss en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Adss junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Adss tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína AdSS2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Adss para la investigación de la señalización de AdSS2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Adss críticos para la función de AdSS2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Adss para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido AdSS2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido AdSS2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Adss. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR AdSS2 (m) y el plásmido HDR AdSS2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Adss para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Adss definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.