Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-418996

Übersicht

Adcy6 kodiert die Adenylatcyclase 6 (AC6/ADCY6), ein membranassoziiertes Enzym, das im Anschluss an die Signalübertragung durch G‑Protein‑gekoppelte Rezeptoren ATP zu cAMP umwandelt. Durch die Gestaltung der cAMP‑Dynamik reguliert AC6 PKA‑ und EPAC‑abhängige Phosphorylierungsprogramme, die die Aktivität von Ionenkanälen, die metabolische Kontrolle und stimulusabhängige Transkriptionsantworten beeinflussen. In Mausgeweben wird ADCY6 häufig mit β‑adrenergen und anderen Gs‑gekoppelten Signalwegen in Verbindung gebracht, die die kardiale Kontraktilität, den Tonus der glatten Atemwegsmuskulatur sowie die renale Salz‑/Wasserhandhabung koordinieren. Eine fehlregulierte cAMP‑Signalgebung unter Beteiligung von ADCY6 wurde mit kardiopulmonalen und nierenrelevanten Phänotypen assoziiert, was seinen Einsatz in mechanistischen Studien zur Integration von GPCR‑Signalen und zur Homöostase von Second Messengern unterstützt.

Das Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Adcy6-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Adcy6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Adcy6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Adcy6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Adcy6-Exone abzielen, die für die Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Adcy6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Adcy6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 HDR-Plasmid (m) und Adenylate cyclase 6/AC6/ADCY6 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Adcy6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Adcy6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.