Plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 (h2): sc-400407-KO-2

Présentation

ADCY3 code l’adénylate cyclase 3 (AC3), une enzyme associée à la membrane qui convertit l’ATP en AMP cyclique (AMPc), modulant ainsi la signalisation de second messager en aval de divers récepteurs couplés aux protéines G (GPCR). En régulant les niveaux intracellulaires d’AMPc, AC3 influence les voies dépendantes de la PKA et d’EPAC qui contrôlent des programmes transcriptionnels, l’activité des canaux ioniques et les réponses métaboliques cellulaires. AC3 est largement étudiée dans les contextes sensoriels et neuroendocriniens et contribue à une signalisation en microdomaines de l’AMPc qui affine le couplage stimulus–réponse. Des données génétiques et fonctionnelles relient la signalisation associée à ADCY3 à des phénotypes métaboliques et à des traits neurocomportementaux, ce qui en fait une cible pertinente pour des études mécanistiques de la régulation dépendante de l’AMPc dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADCY3 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADCY3, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADCY3 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADCY3 pour l'étude de la signalisation de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADCY3 essentiels à la fonction de Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADCY3 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADCY3. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 plasmide HDR (h) et le Adenylate cyclase 3/AC3/ADCY3 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADCY3 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADCY3 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.