Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-402994-ACT

O ADCY2 humano codifica a adenilato ciclase 2 (AC2), uma enzima ligada à membrana que converte ATP em AMP cíclico (cAMP) em resposta à sinalização de receptores acoplados à proteína G, particularmente por meio de entradas estimulatórias de Gαs e moduladoras de Gβγ. Ao ajustar o cAMP intracelular, a AC2 regula programas de fosforilação dependentes de PKA e EPAC que influenciam a atividade de canais iônicos, a liberação de neurotransmissores, respostas metabólicas e saídas transcricionais como a sinalização de CREB. A atividade de ADCY2 é, portanto, essencial para a integração de sinais na membrana plasmática e para a dinâmica temporal da propagação de segundos mensageiros em células excitáveis e não excitáveis. Estudos genéticos e funcionais associaram alterações na regulação da via do cAMP envolvendo ADCY2 a fenótipos neuropsiquiátricos e comportamentais, sustentando sua relevância para estudos mecanísticos de sinalização neuronal e homeostase celular.

Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de ADCY2 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus ADCY2 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição ADCY2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus ADCY2 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Adenylate cyclase 2/AC2/ADCY2 em células tumorais com expressão de ADCY2 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.