ACTA2 Double Nickaseプラスミド (h): sc-400003-NIC

ACTA2は、血管平滑筋細胞や筋線維芽細胞に豊富に発現する主要な収縮性フィラメントタンパク質であるα平滑筋アクチン（ACTA2）をコードしています。ACTA2はFアクチンのストレスファイバーへ重合し、ミオシンモーターと協調して働くことで、細胞骨格の張力、フォーカルアドヒージョンの動態、ならびにメカノトランスダクション（機械刺激のシグナル変換）プログラムを支え、細胞移動や細胞外マトリックスのリモデリングを形作ります。ACTA2の機能は、RhoA/ROCKシグナル伝達、TGF-βによる分化誘導、そして収縮関連遺伝子発現を制御するSRF/MRTFの転写制御と相互に関わっています。ACTA2の発現異常や変異は、血管平滑筋の機能障害やリモデリング表現型に関与し、胸部大動脈瘤／大動脈解離のリスク上昇などと関連づけられています。また、線維化や異常収縮といった文脈でも広く研究されています。

ACTA2 ダブルニカースプラスミド（h）は、human 細胞株における ACTA2 座の高特異性編集のために設計された、対となる2つのプラスミドから構成される。各プラスミドは、Cas9 D10Aニカースと、ACTA2内の対向するDNA鎖を標的とする異なるsgRNAを発現する。対向するDNA鎖上の隣接する部位に誘導されると、2つのニカースはオフセットした一本鎖切断を生成し、これらが組み合わさってずれた二本鎖切断を生じさせる。これにより、両方のガイドによる協調的なオンターゲット活性が必要となる。生じたDNA切断は、細胞内の内在性修復経路、特に非相同末端結合（NHEJ）によって修復され、その結果、ACTA2の機能を阻害する挿入または欠失が生じる。標的座標における2つのsgRNAの結合を必要とするこの二重ニッキング法は、編集の特異性を高め、標的精度に対するさらなる制御が求められる用途において、CRISPR戦略を補完するものである。

編集された細胞を効率的に同定するために、1つのプラスミドはトランスフェクトされた細胞集団を蛍光可視化するためのGFPをコードし、もう1つのプラスミドは抗生物質選別用のプロマイシン耐性遺伝子を保有しています。これらの機能により、共トランスフェクトされた細胞集団の効率的な濃縮が可能となり、ACTA2が破壊されたクローンの検証が簡素化されます。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。