Plasmide CRISPR/Cas9 KO ACSVL6 (h): sc-405327

Présentation

SLC27A5 code pour le membre 6 de la famille des acyl‑CoA synthétases à très longues chaînes humaines (ACSVL6), une enzyme qui active les acides gras à longue chaîne en les convertissant en thioesters d’acyl‑CoA. Cette réaction favorise l’absorption des lipides et leur trafic intracellulaire vers la β‑oxydation mitochondriale et peroxysomale, tout en fournissant des substrats d’acyl‑CoA pour le remodelage lipidique lié aux triglycérides, aux phospholipides et aux acides biliaires. Par ces fonctions, ACSVL6 contribue à l’homéostasie métabolique et s’inscrit dans des voies qui régulent l’équilibre énergétique, la composition des membranes et la signalisation lipidique. Une activation altérée des acides gras et les flux lipidiques en aval sont fréquemment impliqués dans les dysfonctionnements métaboliques et les phénotypes associés au foie, ce qui fait de SLC27A5 une cible utile pour des études mécanistiques du métabolisme lipidique.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO ACSVL6 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SLC27A5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SLC27A5, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SLC27A5 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine ACSVL6.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SLC27A5 pour l'étude de la signalisation de ACSVL6, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SLC27A5 essentiels à la fonction de ACSVL6
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SLC27A5 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le ACSVL6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le ACSVL6 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SLC27A5. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le ACSVL6 plasmide HDR (h) et le ACSVL6 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SLC27A5 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SLC27A5 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.