ACE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400759

Übersicht

Das Angiotensin-konvertierende Enzym (ACE) ist eine zinkabhängige Dipeptidyl-Carboxypeptidase, die die Umwandlung von Angiotensin I in das vasoaktive Peptid Angiotensin II katalysiert und Bradykinin abbaut, wodurch es als zentraler Regulator des Renin–Angiotensin-Systems positioniert ist. Durch die Modulation der Angiotensin-II/AT1R-Signalübertragung beeinflusst ACE den vasomotorischen Tonus, den Natrium- und Flüssigkeitshaushalt, oxidativen Stress sowie Entzündungsprogramme, die in Gefäß- und Nierengeweben mit MAPK- und NF-κB-gekoppelten Antworten verknüpft sind. Die ACE-Aktivität trägt zur Endothelfunktion und zur Homöostase extrazellulärer Peptide bei, und eine veränderte ACE-Expression oder genetische Varianten werden häufig im Kontext der Biologie kardiovaskulärer und renaler Erkrankungen untersucht. Diese Funktionen machen ACE zu einem geeigneten Ansatzpunkt, um in humanen Zellmodellen die Blutdruckregulation, das vaskuläre Remodeling und entzündungsassoziiertes Gewebe-Remodeling zu untersuchen.

Das ACE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des ACE-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des ACE-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von ACE nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die ACE-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von ACE-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der ACE-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf ACE-Exone abzielen, die für die ACE-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere ACE-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom ACE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom ACE CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des ACE-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das ACE HDR-Plasmid (h) und ACE HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von ACE-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten ACE-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.