ACE Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-400759

Panoramica

L’enzima di conversione dell’angiotensina (ACE) è una dipeptidil carbossipeptidasi zinco-dipendente che catalizza la conversione dell’angiotensina I nel peptide vasoattivo angiotensina II e degrada la bradichinina, collocandosi come regolatore centrale del sistema renina–angiotensina. Attraverso la modulazione della segnalazione angiotensina II/AT1R, ACE influenza il tono vasomotorio, l’equilibrio di sodio e fluidi, lo stress ossidativo e programmi infiammatori che si intersecano con risposte mediate da MAPK e NF-κB nei tessuti vascolari e renali. L’attività di ACE contribuisce alla funzione endoteliale e all’omeostasi dei peptidi extracellulari, e l’alterata espressione di ACE o le sue varianti sono frequentemente studiate nella biologia delle malattie cardiovascolari e renali. Queste funzioni rendono ACE un nodo utile per indagare la regolazione della pressione arteriosa, il rimodellamento vascolare e il rimodellamento tissutale associato all’infiammazione in modelli cellulari umani.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ACE (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ACE in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ACE insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ACE a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ACE.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ACE per lo studio della segnalazione di ACE, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ACE critici per la funzione di ACE
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ACE per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ACE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ACE CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ACE. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ACE Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ACE (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ACE per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ACE definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.