ACBD3 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-404320-ACT

Humanes ACBD3 (acyl-CoA binding domain containing 3), auch bekannt als GCP60, ist ein Golgi-assoziiertes Scaffold-Protein, das den Membrantransport und die Kommunikation zwischen Organellen koordiniert. Es interagiert mit Signalkomponenten der Phosphatidylinositol-4-Kinase sowie mit zahlreichen viralen und zellulären Faktoren, um die Golgi-Struktur, die Lipidhomöostase und die Bildung von Replikationsorganellen zu modulieren. Durch seine Rollen beim Vesikel-Tethering, der Proteinsortierung und dem Lipidtransfer an Membrankontaktstellen beeinflusst ACBD3 die Dynamik des sekretorischen Weges und zelluläre Stressantworten. Fehlregulierte, ACBD3-assoziierte Signalwege wurden u. a. im Kontext der Biologie viraler Infektionen und krebsassoziierter Veränderungen der Golgi-Funktion und -Signalgebung untersucht.

ACBD3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen ACBD3-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

ACBD3 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des ACBD3-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der ACBD3-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen ACBD3-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native ACBD3-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von ACBD3-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des ACBD3-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem ACBD3-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.