Plásmido CRISPR de Activación (h) ABHD5: sc-402273-ACT

La ABHD5 humana (también conocida como CGI-58) codifica un coactivador asociado a las gotas lipídicas que acopla la movilización de lípidos neutros con el equilibrio energético celular al estimular la actividad de la lipasa de triglicéridos del tejido adiposo y promover la hidrólisis de triacilglicéridos. Mediante la regulación del recambio de las gotas lipídicas, el flujo de ácidos grasos y la β‑oxidación mitocondrial posterior, ABHD5 ayuda a coordinar la homeostasis metabólica y la señalización lipídica. La alteración de la función de ABHD5 se asocia con un almacenamiento lipídico anómalo y acumulación ectópica de lípidos, lo que vincula esta vía con fenotipos hereditarios de almacenamiento de lípidos neutros y con mecanismos más amplios de enfermedad metabólica. En contextos de cáncer e inflamación, el metabolismo lipídico alterado y la dinámica de las gotas lipídicas influenciados por ABHD5 pueden remodelar la composición de membrana y las respuestas al estrés, lo que la hace relevante para el mapeo de vías en diversos sistemas modelo.

ABHD5 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de ABHD5 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

ABHD5 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus ABHD5 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional ABHD5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de ABHD5. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo ABHD5 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de ABHD5 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía ABHD5 en células tumorales con expresión de ABHD5 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.