ABC1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-418929-ACT

O Abca1 de camundongo codifica o transportador ABC1 da família ATP-binding cassette, um regulador-chave do efluxo celular de colesterol e fosfolipídios para apolipoproteínas, sustentando a biogênese de HDL nascente e a homeostase lipídica. A atividade do ABC1 integra-se a programas transcricionais conduzidos por LXR/RXR e se cruza com o manejo de lipídios por macrófagos, a remodelação de membranas e a sinalização inflamatória. A desregulação da expressão ou da função de Abca1 perturba o tráfego de colesterol, promove a formação de células espumosas e é amplamente estudada no contexto de vias relevantes para a aterosclerose e de fenótipos de armazenamento lipídico. Em modelos murinos, Abca1 também é usado para investigar efeitos dependentes de lipídios na função de células imunes, no metabolismo lipídico hepático e em processos neuroinflamatórios ligados ao transporte de colesterol.

ABC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Abca1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

ABC1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Abca1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Abca1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de ABC1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Abca1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de ABC1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via ABC1 em células tumorais com expressão de Abca1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.