53BP2 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-403004-ACT

TP53BP2は、53BP2（ASPP2としても知られる）をコードしており、p53ファミリータンパク質や他のシグナル伝達パートナーとの相互作用を介して、細胞周期制御、アポトーシス、ストレス応答を司る転写プログラムを調節する多機能アダプターです。53BP2はDNA損傷に関連するチェックポイントの制御に寄与し、細胞極性や遊走に影響し得る細胞骨格および細胞接着（ジャンクション）のダイナミクスにも作用します。TP53BP2の発現異常や相互作用ネットワークの破綻は、さまざまながんの文脈において、アポトーシス能の変化や腫瘍抑制経路シグナルの異常と関連づけられています。p53依存的転写の結節的な制御因子として、TP53BP2はゲノム安定性、プログラム細胞死、腫瘍化（がん化）機構の解明を目的に頻繁に研究されています。

53BP2 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性TP53BP2の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

53BP2 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における TP53BP2 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はTP53BP2転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性53BP2の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のTP53BP2遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座における53BP2依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびTP53BP2発現が沈黙または低下した腫瘍細胞における53BP2経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。