4E-BP1 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-400398-ACT

EIF4EBP1は、EIF4Eに結合してeIF4F複合体の形成を制限する、リン酸化感受性のキャップ依存的翻訳抑制因子である4E-BP1をコードします。PI3K–AKT–mTORシグナル伝達の主要な下流エフェクターとして、4E-BP1は増殖因子、栄養状態、ストレスといった入力を統合し、全体的なタンパク質合成、細胞増殖、代謝適応を調整します。mTORC1による4E-BP1のリン酸化によりEIF4Eが解放され、増殖や生存に関与する転写産物の翻訳が促進されることで、EIF4EBP1の制御はプロテオスタシスおよび細胞周期制御と結びつきます。4E-BP1の活性やリン酸化状態の破綻は、翻訳制御の再配線が疾患関連表現型に寄与するがん生物学、代謝シグナル、ストレス応答などの文脈で頻繁に研究されています。

4E-BP1 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性EIF4EBP1の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

4E-BP1 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における EIF4EBP1 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はEIF4EBP1転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性4E-BP1の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のEIF4EBP1遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座における4E-BP1依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびEIF4EBP1発現が沈黙または低下した腫瘍細胞における4E-BP1経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。