βA4-crystallin Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-419824

Panoramica

Cryba4 codifica la βA4-cristallina, una delle principali cristalline strutturali del cristallino oculare del topo, che contribuisce alle proprietà refrattive e alla trasparenza del cristallino a lungo termine. In quanto membro della superfamiglia delle β/γ-cristalline, la βA4-cristallina partecipa alla differenziazione delle cellule delle fibre del cristallino e alla formazione di assemblaggi proteici strettamente impaccati e altamente ordinati che mantengono l’omogeneità ottica. La sua stabilità e le sue interazioni all’interno delle reti di cristalline influenzano i processi di omeostasi proteica, come il ripiegamento assistito da chaperoni e la protezione dall’aggregazione in condizioni di stress ossidativo e legato all’invecchiamento. L’alterazione o la disregolazione della composizione delle cristalline è associata a fenotipi di opacizzazione del cristallino, a supporto di Cryba4 come locus rilevante per i meccanismi legati alla cataratta e per gli studi sullo sviluppo oculare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO βA4-crystallin (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Cryba4 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Cryba4 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Cryba4 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina βA4-crystallin.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Cryba4 per lo studio della segnalazione di βA4-crystallin, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Cryba4 critici per la funzione di βA4-crystallin
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Cryba4 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal βA4-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal βA4-crystallin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Cryba4. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal βA4-crystallin Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR βA4-crystallin (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Cryba4 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Cryba4 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.