β6 Tubulin CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-400062

Übersicht

TUBB6 kodiert humanes β6‑Tubulin, eine β‑Tubulin‑Isotypvariante, die mit α‑Tubulin zu Heterodimeren assoziiert und so Mikrotubuli bildet, welche die zytoskelettale Architektur und den intrazellulären Transport unterstützen. Die durch die Isotypzusammensetzung des Tubulins bestimmte Mikrotubuli‑Dynamik reguliert den Aufbau des mitotischen Spindelapparats, die Chromosomensegregation und den Zellzyklusverlauf und prägt zudem Zellpolarität und Motilität. β6‑Tubulin ist an Signalwegen beteiligt, die über Interaktionen mit mikrotubuliassoziierten Proteinen und Motorkomplexen den Vesikeltransport und die Positionierung von Organellen steuern. Eine Fehlregulation von Tubulinnetzwerken und des Mikrotubuli‑Verhaltens ist mit proliferativen Phänotypen, chromosomaler Instabilität und veränderten Migrationsprogrammen verbunden, die für die Krebsbiologie und andere zytoskelettassoziierte Erkrankungen relevant sind.

Das β6 Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des TUBB6-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des TUBB6-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von TUBB6 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die β6 Tubulin-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von TUBB6-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der β6 Tubulin-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf TUBB6-Exone abzielen, die für die β6 Tubulin-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere TUBB6-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom β6 Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom β6 Tubulin CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des TUBB6-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das β6 Tubulin HDR-Plasmid (h) und β6 Tubulin HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von TUBB6-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten TUBB6-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.